目前世界上常用的蛋白濃度檢測(cè)方法是：BCA蛋白定量試劑盒(BCA?Protein?AssayKit)和Bradford蛋白定量試劑盒(Bradford?Protein?Assay?Kit)。BCA?法與傳統(tǒng)方法相比，更簡(jiǎn)單、更穩(wěn)定、更靈敏度。BCA法測(cè)定蛋白濃度兼容性亦很好，不受大部分樣本中其他成分的影響，對(duì)于5%以內(nèi)的SDS、Triton?X-100、Tween?20、?Tween?80具有很好的兼容性。BCA法測(cè)定蛋白濃度易受螯合劑、高濃度的還原劑影響。在BCA法測(cè)定蛋白濃度前應(yīng)盡量使EDTA濃度≤m10M;?DTT濃度≤1mM，2-ME≤0.01%。

規(guī)格：250T

保存：室溫,避光,

有效期：12個(gè)月

用途：總蛋白定量的二喹啉甲酸/BCA分析

說明：主要由BCA溶液、Cu溶液、BSA標(biāo)準(zhǔn)品組成,在562nm處測(cè)吸光值,檢測(cè)范圍在200-1000ug/ml。

 

操作注意：

1、?蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)粉末溶解于蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液后，即獲得蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液，該原液中含有防腐劑，不影響后續(xù)檢測(cè)，該蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液-20℃保存。

2、?待測(cè)蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否者待測(cè)蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)中所含非蛋白成分不一致，有可能導(dǎo)致測(cè)定不準(zhǔn)確。

3、?待測(cè)蛋白和蛋白標(biāo)準(zhǔn)加入BCA工作液后，如果發(fā)現(xiàn)檢測(cè)效果不佳，可以室溫放置2h或60℃放置30min，顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深。顯色反應(yīng)也會(huì)隨溫度升高而加快。如果濃度較低，可以適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間或在較高溫度下孵育。
 

4、?測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)發(fā)現(xiàn)隨著標(biāo)準(zhǔn)品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化，可能的原因是樣品中含有嚴(yán)重干擾BCA法測(cè)定蛋白濃度的物質(zhì)。


二價(jià)銅離子在堿性的條件下，可以被蛋白質(zhì)還原成一價(jià)銅離子，一價(jià)銅離子和*的BCA　Solution　A（含有BCA）相互作用產(chǎn)生敏感的顏色反應(yīng)。兩分子的BCA螯合一個(gè)銅離子，形成紫色的反應(yīng)復(fù)合物。該水溶性的復(fù)合物在562nm處顯示強(qiáng)烈的吸光性，吸光度和蛋白濃度在廣泛范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，因此根據(jù)吸光值可以推算出蛋白濃度。


BCA蛋白定量試劑盒操作方便，快捷！